株式会社 森永生科学研究所
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測定原理、操作手順

測定原理

マウスインスリン測定キットの測定原理
<一次反応> 検体中のインスリンがプレート上で、固相化抗インスリンモノクローナル抗体-インスリン-モルモット抗インスリン抗体の複合体を形成する。
<二次反応> 酵素標識抗モルモットIgG抗体がモルモット抗インスリン抗体に結合する。
<酵素反応> 酵素基質溶液を加えると、プレート上の複合物に結合した酵素により呈色する。
得られた吸光度に対応するインスリン濃度を標準曲線から算出する。

操作手順

測定準備 標準曲線用インスリン溶液、および検体を用意
 
一次反応 1)モルモット抗インスリン血清を95μL/ウェルで分注
2)標準曲線用インスリン溶液または検体を5μL/ウェルで添加
3)4℃で一晩(16〜20時間)静置して反応
 
洗浄 300μL/ウェルの洗浄液で3回洗浄
 
二次反応 1)酵素標識抗モルモットIgG抗体溶液を100μL/ウェルで分注
2)常温で1時間静置して反応
 
洗浄 300μL/ウェルの洗浄液で5回洗浄
 
酵素反応 1)酵素基質溶液を100μL/ウェルで分注
2)遮光下常温で30分間静置して反応
 
反応停止 反応停止液を100μL/ウェルで添加
 
吸光度測定 プレートリーダーで各ウェルの吸光度を測定
吸光度は、反応停止後30分以内に測定してください。
 
濃度算出 得られた吸光度より検体中のインスリン濃度を算出

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